高成功率直接PCR酶KODF

浏览量: 58   / 时间:2019-12-15   /作者:线上体育平台

KODFX是在KODDNApolymerase基礎上開發的高性能PCR試劑。本酶具有出色的「擴增成功率」、「延伸性」和「擴增效率」,可對各種長度的目的片段進行PCR。KODFX是PCR成功率非常高,適合于所有實驗的PCR酶。實際測序結果表明,KODFX在PCR過程中,產生堿基錯配的頻率(錯配率)144535個堿基中僅為19個(保真性是TaqDNApolymerase的約11倍)。由此可見,KODFX的保真性雖比KOD-Plus-、KOD-Plus-Ver.2和KOD-Plus-Neo要差一些,但仍可進行充分的克隆。通過本酶擴增的DNA片段的末端基本上都被平滑化。

●通過熱啟動提高了PCR的反應效率通過將2種抗KOD單克隆抗體預混合在酶中,抑制了PCR反應前常溫狀態下的多聚酶活性和3'→5'Exonuclease活性。抗體在PCR最初的變性步驟即發生失活,但對擴增反應沒有任何影響。

向直接PCR反應液中添加堿裂解法(請參照右邊的基本反應條件)制備的鼠尾裂解液0.5μl,以Mousemembraneglycoprotein(Thy-1)gene(M10246)為目的基因,用2步法循環,作30個循環的擴增。

向直接PCR反應液中添加一步法(請參照右邊的基本反應條件)制備的番茄、煙葉、稻葉及精米裂解液1μl,以rbcL為目的基因,用2步法循環,作30個循環的擴增。結果顯示,只有使用KODFX時,才可確認到明確的擴增。通過將一步法與KODFX組合,就可以簡便地對植物基因進行分析。

擴增反應中,以0.1ng~100ng的基因組DNA為模板,以humanβ-globin2.8kb為目的基因,50μl反應體系,引物15pmoles,KODFX使用了1U,按2步法,作了30個循環的擴增。

*基本上以2步法循環進行。引物的Tm值低于68℃或用2步法循環未見擴增時,請試一下3步法循環。另外,擴增10kb以上的目的片段時,如果出現LongPCR片段或非特異條帶及彌散,請試一下Stepdown循環。