熱啟動Taq抗體antiTaqhigh

浏览量: 59   / 时间:2019-12-15   /作者:线上体育平台

采用了可確保抑制PCR反應前常溫下的聚合酶活性(45℃事可達95%以上)的高活性抗體。特征2簡便與已有的TaqDNApolymerase混合即可,非常簡便。且可用于TaqBase的LongPCR用酶。

1.以人基因組DNA為模板的PCR例以β-globincluster內的3.6kb為目的片段,使用A公司生產的LongPCR用酶、anti-Taqhigh、B公司生產的熱啟動用抗體進行PCR。結果顯示,僅用A公司的酶無法確認到條帶,而使用anti-Taqhigh進行熱啟動PCR則可確認到條帶。此外,使用anti-Taqhigh比使用B公司抗體可獲得更好的結果。由此可見,anti-Taqhigh對以TaqDNApolymerase為基礎的LongPCR用酶進行熱啟動的效果要比其他抗體好。

PCR反應的問題在于進入PCR循環之前的升溫過程中,會發生引物與模板DNA形成非特異性雙鏈雜交體,或引物之間形成引物二聚體的現象。這些都是產生雜帶和引物二聚體的原因。熱啟動PCR對這些副作用進行了回避,是一種提高目的片段擴增效果的有效的方法。其中,使用抗體,在常溫階段抑制聚合酶活性的熱啟動法具有很大的優點。本產品使用的抗Taq抗體,在70℃以下時會與TaqDNApolymerase相結合,抑制其活性。因此如果采用事先與該抗體結合的TaqDNAPolymerase,則可以防止在PCR反應的第一循環中的非特異性反應的發生。本抗體在70℃以上可迅速失活,不會對之后的TaqDNApolymerase反應產生影響。使用抗體的熱啟動法,與化學修飾熱啟動法不同,無需長時間的變性步驟,具有在第一循環的變性步驟中即可完全失活的優點。

已通過PCR確認,沒有Mouse基因組的污染。●適用于以TaqDNApolymerase為基礎的LongPCR用酶:本抗體可用于以TaqDNApolymerase為基礎的長片段・高效率用PCR酶。●基本反應條件TaqDNApolymerase1Uanti-Taqhigh0.2μlorTaqDNApolymerase(5U/μl)+等量的anti-Taqhigh↓室溫、5min

1)D'Aquila,R.T.etal.,Nucl.Acids.Res.,19:3749(1991)2)Chou,Q.etal.,Nucl.Acids.Res.,20:1717(1992)3)Kellogg,D.E.etal.,BioTechniqus,16:1134(1994)