DNA堿基序列測定

浏览量: 65   / 时间:2019-12-15   /作者:线上体育平台

1.獲得待測DNA片段的單鏈模板:一般采用基因工程的方法以獲取一定數量的單鏈待測DNA模板。可將待測DNA片段與噬菌體M13DNA進行重組,然后將其導入大腸桿菌進行增殖,M13噬菌體一般以單鏈DNA形式透出細胞再感染新的細菌,故此可獲得單鏈DNA模板。

4.互補鏈的延長和終止:將上述雜交混合液分為四份,每份混合液中均加入DNA聚合酶,四種dNTPS,一種帶放射性同位素標記的脫氧核糖核酸(如α-32P-dATP)。此外還需分別加入一種雙脫氧核糖核酸(ddATP,ddGTP,ddCTP或ddTTP)。然后在適當溫度條件下延伸互補鏈,就可得到四組分別以A、G、C、T、終止的長短不一的互補鏈的混合物。