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浏览量: 193   / 时间:2019-12-15   /作者:线上体育平台

1977年,英國人FredSanger發現在DNA復制過程中摻入ddNTP,會產生一系列末端終止的DNA鏈,并能通過電泳按長度分辨。不同末端終止DNA鏈的長度是由摻入到新合成鏈上隨機位置的ddNTP決定的。由此誕生了以Sanger命名的測序原理即雙脫氧鏈終止法測序原理。

1.如果您提供的樣品是PCR產物,在測序報告上找不到您的引物是正常的。這是因為測序反應是通過對被熒光標記的ddNTP的讀取而獲得基因序列的,而測序引物由于沒有熒光標記,因此自然在測序結果中就不會被識別。有兩種方法可以得到您的引物序列。對于較短的PCR產物(<800bp),可以用另一端的引物進行測序,從另一端測序可以一直測到序列的末端,就可以在序列的末端得到您的引物的反向互補序列。對于較長的序列,一個測序反應測不到頭,因此就只能將您的PCR產物片段克隆到適當的載體中,用載體上的通用引物進行測序。由于載體上的通用引物與您的插入序列之間還有一段距離,因此就可以得到您的完整的引物序列。由于在測序的起始端總會有一些堿基無法準確讀出,因此,您如果想得到您的PCR產物的完整序列,最好克隆后進行測序。

3730XL測序儀可以高自動化操作,2小時左右即可達到測序要求;液體分離膠使讀序長度達1100bp,精確讀長達800bp。利用Seqence5.2新型堿基識別與質量評分軟件,測序準確性有了極大的提高;電泳溫度可達70C,有效去除二級結構的影響;雙色激光兩側同時激發,使得靈敏度極高,熒光信號強度高度均勻,提高了測序模板DNA的濃度的適應范圍并且能進行超速測序。