高效率qRT試劑盒FSQ10

浏览量: 76   / 时间:2019-12-15   /作者:线上体育平台

在ReverTraAce®qPCRRTKit的反應體系(10μl)中,分別添加HeLa細胞來源的totalRNA0.5μg-0.5pg,分別進行逆轉錄反應。然后,采用和實驗例2同樣的方法進行cDNA合成量的比較。結果可見,在探討的范圍內,模板RNA的量和cDNA的得率密切相關,但無論模板RNA量的多寡,仍可維持很高的cDNA合成效率。由此可見,在目的片段濃度有差異的樣品之間,逆轉錄反應效率的變化并不大,因此可將定量結果的誤差控制在最小范圍內。

以來源于HeLa細胞的totalRNA100ng為模板,根據各公司試劑盒推薦的條件進行逆轉錄反應。然后,在RealtimePCR反應液(使用本公司SYBRGreenRealtimePCRMasterMix)中分別添加上述的逆轉錄反應液各1%(V/V),用RealtimePCR對β-Actin和Polymeraseε的cDNA量進行定量。結果可見,在使用本試劑盒的情況下,兩個目的片段都有最高的得率。

1)M.Hattaetal.,Intl.J.Mol.Med.,9:147-152(2002)2)K.Miyazakietal.,J.Bacteriology.,185:2219-2226(2003)3)A.Nezuetal.,Biochem.J.,263:59-66(2002)4)S.Nakashimaetal.,J.Biochem.(Tokyo),131:241-246(2002)5)S.Atsumietal.,EMBOJ.,20:5453-5460(2001)6)Y.Yabutaetal.,PlantCellPhysiol.,41:666-675(2000)7)S.Leeetal.,Gene,245:253-266(2000)

由于模板RNA的殘留會對PCR產生抑制作用,一般情況下,逆轉錄反應結束后需通過RNaseH對模板RNA進行分解。但本試劑盒采用了本公司新開發的體系,模板RNA在逆轉錄反應后通過非酶方法去除(正在申請專利),因此逆轉錄反應后無需進行RNaseH處理。